淺析WB實(shí)驗(yàn)代測的4個條件及注意事項(xiàng)

更新時間：2020-04-13

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　　一：WB實(shí)驗(yàn)代測的4個條件：

　　1、凝膠洗脫：轉(zhuǎn)移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無法在膜上進(jìn)行分析。

　　2、處理期間仍截留在膜上：在轉(zhuǎn)移后的處理過程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上。

　　3、吸附到膜上：在轉(zhuǎn)移過程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進(jìn)行分析。

　　4、處理過程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無法檢測。

　　以上是小編為大家講解的產(chǎn)品代測的四個條件，那么小編接下來進(jìn)一步講解基本過程及注意事項(xiàng)有哪些？

　　二：WB實(shí)驗(yàn)代測的基本過程：

　　1、獲取細(xì)胞或組織裂解物。

　　2、根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解。

　　3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準(zhǔn)確性。

　　4、蛋白定量。

　　5、電泳分離蛋白質(zhì)。

　　6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。

　　7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。

　　8、一抗孵育。

　　三：WB實(shí)驗(yàn)代測需要注意以下幾點(diǎn)：

　　1、選擇適合檢測標(biāo)本種屬的一抗。

　　2、選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體。

　　3、選擇適用于WB實(shí)驗(yàn)方法的一抗。

　　4、二抗孵育：孵育條件一般為室溫1-2小時。

　　5、結(jié)果分析和檢測：凝膠成像系統(tǒng)檢測或者暗室曝光到膠片。

　　6、底物孵育：選擇顯色或者化學(xué)發(fā)光底物。一般傾向于化學(xué)發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量。

　　以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容，希望對大家有所幫助。

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